上海瑞齐-Elisa试剂盒
- 2010年09月18日 08:48:00来源：上海瑞齐生物科技有限公司作者：上海瑞齐生物科技有限公司
人巨噬细胞炎症蛋白2（MIP-2）酶联免疫分析试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围： 96T
15pg/ml-400pg/ml
使用目的：
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中巨噬细胞炎症蛋白2（MIP-2）含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人巨噬细胞炎症蛋白2（MIP-2）水平。用纯化的人巨噬细胞炎症蛋白2（MIP-2）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入巨噬细胞炎症蛋白2（MIP-2），再与HRP标记的巨噬细胞炎症蛋白2（MIP-2）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的巨噬细胞炎症蛋白2（MIP-2）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人巨噬细胞炎症蛋白2（MIP-2）浓度
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
1. 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
2. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
3. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
4. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
5. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
6. 温育：操作同3。
7. 洗涤：操作同5。
8. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
9. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
10. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
